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名稱描述內容

MG601 MG602重組蛋白L磁珠

    發(fā)布時間: 2025-01-21 10:31    

重組蛋白 L磁珠(Recombinant Protein L Magnetic Beads),,由NHS 活化的超順磁性微球與Protein L共價結合形成的復合微粒,該產品具有較高的抗體結合能力和較低的蛋白非特異吸附率,,洗脫條件均一,,一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體;尤其適用于同時純化多個樣品,,樣本和磁珠的體積范圍也可靈活的調整,,純化的過程能夠簡便的放大,配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本,。


磁珠的參數和指標見Table 1,,產品規(guī)格見 Table 2。


Table 1:重組蛋白 L磁珠參數和性能指標


基質

瓊脂糖

配基

Protein L

粒徑

0-37μm

抗體結合能力

≥30mg IgG/mL(磁珠純體積)

磁珠濃度

20%(v/v)

儲存溫度

2-8℃

保質期

2年

 

Table 2:產品規(guī)格


產品名稱

貨號

磁珠濃度

規(guī)格

重組蛋白 L磁珠

MG601

20% v/v磁珠

5ml

MG602

20% v/v磁珠

50ml


注意:重組蛋白 L磁珠,,2-8℃ 保存,,不要冷凍,,禁止磁珠在儲存和使用過程中變干,。


使用須知

本產品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),以保持最大結合效率

在使用及保存磁珠過程中,,禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍,,離心磁珠,,防止對磁珠產生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復純化同種蛋白

應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗

用后及時再生,避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,,避免磁珠長菌

 

應用場景

知禾泰克重組蛋白 L磁珠專為高通量抗體純化開發(fā),,應用場景包括重組抗體培養(yǎng)基條件優(yōu)化篩選,重組抗體表達條件的優(yōu)化篩選,,雜交瘤抗體篩選,,腹水抗體純化,重組抗體活性評價和穩(wěn)定細胞株篩選等,。

使用方法

實驗前準備

推薦緩沖液:

Binding/ Wash Buffer

PBST(137mM NaCl,,2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2.0mM KH2PO4,0.1% Tween-20),pH 7.2-7.4

Elution Buffer

100mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5

Neutrilization buffer

1.0M Tris-HCl, pH 9.0

Storage buffer

PBST(含0.05% NaN3)

 

操作步驟

以純化人血清為例,,具體操作如下:


樣品處理


取人血清100μL (一般血清樣品中抗體含量約2-8mg/mL)至1.5mL 離心管中,,加入900μL Binding/Washing buffer,充分混勻,。


磁珠預處理


1)充分混勻磁珠后,,取200μL 磁珠懸液到2mL 離心管中,磁性分離,,棄上清,;

2)加入1mL Binding/Washing Buffer 于離心管中,,反復顛倒3-5 次使磁珠充分重懸,磁性分離,,棄上清,;該步驟重復一次。

注:磁珠的用量可根據磁珠對目標抗體的最大結合量進行調節(jié),,可根據磁珠的抗體結合能力計算磁珠的大概用量,,建議磁珠用量應為目標抗體含量的1.2-1.5 倍。



結合


在處理好的磁珠管中加入步驟4.1 處理的樣品溶液,,振蕩均勻,,在室溫下置于翻轉混合儀或者手動輕輕翻轉,使樣品和磁珠充分接觸混合結合15mins,,進行磁性分離,,棄上清。


漂洗


加入1mL 的Binding/Washing Buffer 于離心管中,,反復顛倒3-5 次使磁珠充分重懸,,磁性分離,棄上清,;再重復該步驟2 次,。


洗脫


1) 加入0.5-1mL Elution Buffer,室溫下置于翻轉混合儀或者手動輕輕翻轉10mins,,置于磁力架上進行磁性分離,,收集洗脫液到新的離心管中,即為純化的目標抗體,;

2) 若需要,,可重復上述步驟,收集洗脫液至新離心管中,,以檢測目標抗體是否完全洗脫(Elution Buffer 用量建議最終洗脫抗體濃度在0.5-1.2mg/mL,,以確保一次洗脫可將95%以上的目標抗體被洗脫下來,用量過少會導致洗脫后仍有部分抗體殘留于磁珠上),。


中和


在以上含抗體的洗脫液中加入1/10 抗體洗脫體積的Neutrilization buffer,,混勻使其pH值保持在中性環(huán)境下,以維持抗體的生物活性,,避免失活,。


磁珠后處理


1) 向裝有磁珠的離心管中加入1mL Elution Buffer,渦旋震蕩5s,,磁性分離棄上清,。重復操作2 次;

2) 加入1mL Binding/Washing buffer,渦旋5s,,磁性分離棄上清;重復操作2 次,;

3) 加入Storage buffer 重懸磁珠,,置于2-8℃保存。


磁珠再生


磁珠多次使用后會有沉淀蛋白,、強疏水性蛋白,、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上,為了保證磁珠的使用效率,,建議持續(xù)使用5 次后進行磁珠再生處理,。

1) 約每1 mL(10mg/mL)磁珠加入1 mL(1%,v/v)Triron X-100 磁珠再生緩沖液,,振蕩均勻,,在室溫下置于翻轉混合儀或者手動翻轉混合10 mins 后進行磁性分離,棄上清,;

2) 加入1 mL Binding/Washing buffer 進行重懸,,磁性分離,棄上清,,重復該操作3 次,;

3) 加入1 mL Storage buffer 重懸磁珠,置于2-8℃保存,。


流程優(yōu)化


磁珠與抗體的的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關,,請確認抗體的類型與Protein L 配基的親和效率(附表):

1.抗體所屬亞型與Protein L 的親和度較低:a. 增加抗體與磁珠的孵育時間(30-120mins);b. 提高結合緩沖液的pH 值(8-9),;c. 降低離子強度(25-100 mM NaCl)等方法提高親和效率,;d. 選擇與目標抗體具有更高親和度的配基(如Protein G 或Protein A)。

2.抗體與Protein L 配基親和度太高導致抗體洗脫效率低:a.降低洗脫緩沖液的pH 值1.9-2.5,;b.增大洗脫緩沖液的離子強度(可選用2-3 M MgCl2),;c.延長洗脫時間,提高洗脫效率,。


附表


Ig origin

Affinity for Protein L

Human IgG

+++

Human IgG1,2,4

++++

Human IgG3

+++

Human IgM

+++

Goat IgG1 ,2

-

Sheep IgG

-

Sheep IgG1,2

-

Rat IgG

+++




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