在抗體藥物開發(fā)、分子酶開發(fā)、免疫診斷、檢測試劑開發(fā)及科學研究等領域,上游篩選得到大量候選克隆,需要進行初步評測,前提是對大量原始樣本進行高通量微量制備。比如抗體藥物開發(fā)過程中,通過抗體庫或者雜交瘤等篩選方法初篩得到成百上千個陽性候選克隆,需要高通量純化、濃縮,得到純度和濃度適用于活性評測的樣品。目前,常用的蛋白純化方法是柱層析法,該方法在實現(xiàn)高通量和自動化方面有局限性,成百上千候選克隆的柱層析純化需要消耗大量人力和時間,所以迫于時間和成本壓力,研發(fā)過程中通常會放棄大部分初篩陽性候選克隆,只挑選少量克隆進行表達純化和評測,導致丟失 “優(yōu)秀克隆”。
純化案例
案例1:自動純化293細胞瞬轉培養(yǎng)上清(人IgG)(PP24+蛋白A磁珠)
純化結果:
SDS-PAGE變性電泳圖:
案例2:自動純化小鼠腹水(小鼠IgG)(PP32+蛋白A磁珠)
純化結果:
SDS-PAGE變性電泳圖:
案例3:自動純化原核表達上清(His-tag Protein)(PP96+Ni磁珠)
純化結果:
SDS-PAGE變性電泳圖: