1.無(wú)血清,,無(wú)動(dòng)物源蛋白,,有效避免病毒和支原體污染。
2.使用方便,,凍存前無(wú)需程序降溫,。
3.兼容-80度冰箱和液氮凍存。
4.兼容孔板(如96孔板,、48孔板)和凍存管凍存,。
1.96孔板大規(guī)??焖傥⒘?jī)龃骐s交瘤細(xì)胞株候選克隆
2.無(wú)血清凍存293和CHO穩(wěn)定細(xì)胞株
3.常規(guī)凍存?zhèn)鞔?xì)胞系
選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。
1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞,,置于離心管中,,細(xì)胞計(jì)數(shù)
2.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,,RT, 3~5 min)
3.于離心管中加入適量的無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞濃度為5×105至5×106 cells/ml,。緩慢地混合均勻,,制成細(xì)胞混合液。
4.將細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中,。
5.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,,長(zhǎng)期冷凍保存。
6.若研究者需要液氮保存時(shí),,可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐,。
1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,,立即放入37℃振動(dòng)水浴槽中快速解凍,。
2.待細(xì)胞混合液完全融化后,立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基與細(xì)胞混合,,再將細(xì)胞混合液移入含有4倍體積細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中,,混合均勻。
3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,,RT, 3~5 min),,充分棄除離心上清。
4.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,,進(jìn)行混合和稀釋,。
5.鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要,,調(diào)整細(xì)胞密度,,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞:
1. 孔板中細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且匯合度達(dá)到50%以上時(shí),,從細(xì)胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈。
2. 加入適量(體積根據(jù)孔板定,,一般96孔板加100 ul, 48孔板加200 ul)無(wú)血清細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)孔板中,,充分浸潤(rùn)細(xì)胞。
3. 蓋上蓋板,,做好密封措施,,防止染菌。
4. 直接將含凍存液的細(xì)胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱,,長(zhǎng)期冷凍保存,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1. 孔板中細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且密度達(dá)到5×105至5×106 cells/ml時(shí),用水平離心機(jī)離心(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,,RT, 3~5 min),,從細(xì)胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈,。
2. 加入適量(體積根據(jù)孔板定,一般96孔板加100 ul, 48孔板加200 ul)無(wú)血清細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)孔板中,,充分浸潤(rùn)細(xì)胞,。
3. 蓋上蓋板,做好密封措施,,防止染菌,。
4. 直接將含凍存液的細(xì)胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱,長(zhǎng)期冷凍保存,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞:
1.從冰箱里取出冷凍的細(xì)胞培養(yǎng)板,立即放入37℃培養(yǎng)箱中解凍,。
2.待細(xì)胞凍存液完全融化后,,將液體小心吸取干凈,立即加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基,。
3.置37℃,,5%CO2培養(yǎng)箱常規(guī)傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1.從冰箱里取出冷凍的細(xì)胞培養(yǎng)板,,立即放入37℃培養(yǎng)箱中解凍,。
2.待細(xì)胞凍存液完全融化后,用水平離心機(jī)離心(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,,RT, 3~5 min),,將液體小心吸取干凈,立即加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。
3.置37℃,,5%CO2培養(yǎng)箱常規(guī)傳代培養(yǎng)。
1.質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,,為期1年,。
2.短期保存于2-8℃,長(zhǎng)期保存于-20℃,。
3.為避免反復(fù)凍融影響產(chǎn)品性能,大包裝產(chǎn)品推薦分裝后,,存放于-20℃?zhèn)溆?/span>,。
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