Ni TED Magnetic Beads 瓊脂糖磁珠是一種用于純化帶有組氨酸(His)標簽蛋白的新工具, 其具有超順磁性,可通過外加磁場實現(xiàn)快速的分離與回收。本產品的活性基團為螯合有 Ni2+ 的TED,由于TED對鎳離子超強的螯合能力,使親和Ni-TED能夠耐受高濃度的螯合劑EDTA 和還原劑DTT,適用于含有EDTA 或DTT等成分的組氨酸標記(His-Tag)的基因工程蛋白質以的分離純化。與傳統(tǒng)的 Ni-NTA 介質相比,Ni TED Magnetic Beads有以下優(yōu)勢:
操作簡單且快速,無需對樣品進行澄清處理,可以直接從復雜樣本中捕獲帶有組氨酸標簽的目標蛋白,極大的簡化了純化工藝和提高純化效率
耐受EDTA或DTT等成分,適用于真核表達樣品的直接純化
耐受NaOH,無需脫鎳即可清洗,大大縮短了磁珠再生時間
高純度、高收率
易于平行重復
易于放大
產品介紹
基質 | 高交聯(lián)瓊脂糖、四氧化三鐵納米顆粒 |
螯合金屬離子 | Ni2+ |
金屬離子密度 | ≥20 μmol/mL 磁珠(100%) |
磁珠濃度 | 10% (v / v) |
粒徑分布 | 40-100 μm |
載量 | ≥10 mg/mL 磁珠(100%) |
化學穩(wěn)定性 | 常規(guī)水相緩沖液,8 M 尿素,6 M 鹽酸胍,1 M 氫氧化鈉,100mM EDTA |
儲存條件 | 20%乙醇,2-8℃ |
產品名稱 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存條件 |
Ni TED Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
本產品須與磁性分離設備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預處理要充分
孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),以保持最大結合效率
在使用及保存磁珠過程中,禁止磁珠長時間干燥
禁止冷凍,離心磁珠,防止對磁珠產生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復純化同種蛋白,當純化性能降低時,可進行再生處理
應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗
1. 常用緩沖液
Binding Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 20 mM Imidazole, pH8.0 |
Wash Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 50 mM Imidazole, pH8.0 |
Elution Buffer-1 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 250 mM Imidazole, pH8.0 |
Elution Buffer-2 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 500 mM Imidazole, pH8.0 |
Storage Buffer | 20% (v/v) Ethanol |
緩沖液的配制影響目的蛋白的回收率和純度,在純化較大規(guī)模蛋白之前,需做好預實驗,篩選出適用于目的蛋白的緩沖液體系。
在結合緩沖液中添加少量咪唑可以減少雜蛋白的吸附;洗脫時,不確定最佳洗脫咪唑濃度的情況下,推薦使用不同梯度洗脫,并收集上清液做 SDS-PAGE 電泳驗證,確定合適的洗脫濃度。
細胞分泌表達的樣品直接用Binding Buffer稀釋2-3倍,混合均勻備用;
細胞胞內表達的樣品,用 Binding Buffer 重懸,按需加入蛋白酶抑制劑(例如:終濃度為 1 mM的 PMSF),攪拌混合均勻,冰浴超聲裂解細胞備用。
取一定量磁珠至 EP 管中,置于磁力架上,使磁珠沉降,移除上層的 Storage Buffer,用與Storage Buffer等體積的 Binding Buffer (例如取400ul 10% V/V的磁珠,磁珠體積是40ul, Storage Solution的體積是360ul,這里加入360ul)洗滌 2-3 次,磁性分離后加Binding Buffer調整磁珠體積比為10%,保留磁珠備用。
將磁珠加入步驟 2.1 的樣品中,在室溫下使用混合儀或搖床翻轉 EP 管,使磁珠充分的分散在樣品溶液中,約30 min 后進行磁性分離,移出上清液,留樣檢測或廢棄(對于部分易降解的蛋白,建議在 2~8℃下孵育 1 h 以上)。
在上一步 EP 管中加入與Storage Buffer等體積的 Wash Buffer,翻轉重懸磁珠后進行磁性分離,移出上清液,留樣檢測或廢棄,可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。
將與Storage Buffer等體積的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中,在室溫下使用垂直混合儀或手動輕柔翻轉 EP 管,使磁珠充分的分散,10 min 后進行磁性分離,移取上清液至新 EP 管,可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。
注:建議用戶在第一次洗脫后再重復洗脫 1-2 次,確保目的蛋白充分回收;微球上 90%結合的目的蛋白在第一次洗脫時會被洗脫,因此,之后的洗脫時間及洗脫液體積均可自定義,翻轉混合均勻后磁性分離即可。
使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗滌 2 次,磁性分離后移除上清液;之后用去離子水洗
滌 2 次,磁性分離后移除上清液;加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 10%(v/v),置于 2-8℃保存。
Ni TED Magnetic Beads 瓊脂糖磁珠在連續(xù)使用 8~10 次后,若出現(xiàn)載量明顯下降的現(xiàn)象時,表明螯合的 Ni2+有部分脫落,建議進行再生處理,需準備以下緩沖液。
Beads Washing Buffer 1 | 0.5 M NaOH |
Beads Washing Buffer 2 | 0.1M Na2HPO4,1.5M NaCl,pH7.4 |
Beads Washing Buffer 3 | 30%異丙醇/70%乙醇 |
具體操作流程如下:
(1)取結合性能降低的磁珠至 EP 管中,磁性分離移除上清液,加入與3倍磁珠體積的 Beads Washing Buffer 1,重懸磁珠,室溫混合 30 min,磁性分離,去除上清液;
(2)加入與3倍磁珠體積的Beads Washing Buffer 2,手動翻轉 EP 管使磁珠重懸,1min后磁性分離后移除上清液,重復 3 -5次,洗至中性;
(3)加入3倍磁珠體積的Beads Washing Buffer 3,在室溫下使用混合儀翻轉 EP 管,使磁珠重懸,5 min 后磁性分離移除上清液;
(4)加入3倍磁珠體積的去離子水,手動翻轉 EP 管使磁珠重懸,磁性分離后移除上清液,重復 3~5 次 。
(5)磁性分離后移除上清液,加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 25%(v/v),置于 2-8℃保存。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |
重組蛋白和細胞因子 | 抗體 | 蛋白純化設備&磁珠 | 無血清細胞凍存液 | 感受態(tài)細胞 | 確定 |