產(chǎn)品介紹

Table 1：NI TED Magnetic Beads 參數(shù)和性能指標

Table 2：試劑和規(guī)格

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離設備配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài)，以保持最大結合效率

在使用及保存磁珠過程中，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍，離心磁珠，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復純化同種蛋白，當純化性能降低時，可進行再生處理

應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗

使用方法

1. 常用緩沖液

緩沖液的配制影響目的蛋白的回收率和純度，在純化較大規(guī)模蛋白之前，需做好預實驗，篩選出適用于目的蛋白的緩沖液體系。

在結合緩沖液中添加少量咪唑可以減少雜蛋白的吸附；洗脫時，不確定最佳洗脫咪唑濃度的情況下，推薦使用不同梯度洗脫，并收集上清液做 SDS-PAGE 電泳驗證，確定合適的洗脫濃度。

2.  手動純化流程

2.1 樣品制備

細胞分泌表達的樣品直接用Binding Buffer稀釋2-3倍，混合均勻備用；

細胞胞內(nèi)表達的樣品，用 Binding Buffer 重懸，按需加入蛋白酶抑制劑（例如：終濃度為 1 mM的 PMSF），攪拌混合均勻，冰浴超聲裂解細胞備用。

2.2 磁珠預處理

取一定量磁珠至 EP 管中，置于磁力架上，使磁珠沉降，移除上層的 Storage Buffer，用與Storage Buffer等體積的 Binding Buffer （例如取400ul 10% V/V的磁珠，磁珠體積是40ul， Storage Solution的體積是360ul，這里加入360ul）洗滌 2-3 次，磁性分離后加Binding Buffer調(diào)整磁珠體積比為10%，保留磁珠備用。

2.3 結合

將磁珠加入步驟 2.1 的樣品中，在室溫下使用混合儀或搖床翻轉 EP 管，使磁珠充分的分散在樣品溶液中，約30 min 后進行磁性分離，移出上清液，留樣檢測或廢棄（對于部分易降解的蛋白，建議在 2~8℃下孵育 1 h 以上）。

2.4 漂洗

在上一步 EP 管中加入與Storage Buffer等體積的 Wash Buffer，翻轉重懸磁珠后進行磁性分離，移出上清液，留樣檢測或廢棄，可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。

2.5 洗脫

將與Storage Buffer等體積的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中，在室溫下使用垂直混合儀或手動輕柔翻轉 EP 管，使磁珠充分的分散，10 min 后進行磁性分離，移取上清液至新 EP 管，可根據(jù)需要配制不同咪唑濃度的漂洗液分步漂洗。

注：建議用戶在第一次洗脫后再重復洗脫 1-2 次，確保目的蛋白充分回收；微球上 90%結合的目的蛋白在第一次洗脫時會被洗脫，因此，之后的洗脫時間及洗脫液體積均可自定義，翻轉混合均勻后磁性分離即可。

2.6 磁珠后處理

使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗滌 2 次，磁性分離后移除上清液；之后用去離子水洗

滌 2 次，磁性分離后移除上清液；加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 10%（v/v），置于 2-8℃保存。

3. 磁珠再生

Ni TED Magnetic Beads 瓊脂糖磁珠在連續(xù)使用 8~10 次后，若出現(xiàn)載量明顯下降的現(xiàn)象時，表明螯合的 Ni2+有部分脫落，建議進行再生處理，需準備以下緩沖液。

具體操作流程如下：

（1）取結合性能降低的磁珠至 EP 管中，磁性分離移除上清液，加入與3倍磁珠體積的 Beads Washing Buffer 1，重懸磁珠，室溫混合 30 min，磁性分離，去除上清液；

（2）加入與3倍磁珠體積的Beads Washing Buffer 2，手動翻轉 EP 管使磁珠重懸，1min后磁性分離后移除上清液，重復 3 -5次，洗至中性；

（3）加入3倍磁珠體積的Beads Washing Buffer 3，在室溫下使用混合儀翻轉 EP 管，使磁珠重懸，5 min 后磁性分離移除上清液；

（4）加入3倍磁珠體積的去離子水，手動翻轉 EP 管使磁珠重懸，磁性分離后移除上清液，重復 3~5 次 。

（5）磁性分離后移除上清液，加入 Storage Solution 使磁珠濃度為 25%（v/v），置于 2-8℃保存。

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